WB 是蛋白定性和定量的金標準，常應用于研究生物樣品中蛋白豐度的變化。由于 WB 檢測包含多個步驟，樣品制備、上樣或轉膜等實驗過程中任何細微的差異，都可能導致實驗結論的不一致，甚至相悖。為了避免實驗操作差異引起的實驗誤差，在任何 WB 檢測實驗中，都需要設定合適的內參。

內參即內部參照（Internal Control），可以幫助確定樣品間表達水平的差異，以判斷是由細胞裂解物的實際蛋白水平導致，還是由上樣量的差異導致，需要強調的是內參抗體應該與實驗抗體在相同的印跡上進行。因此選擇的內參蛋白必須是實驗樣本中穩定表達的蛋白，一般會選擇組成型表達且是細胞基本功能必需的管家蛋白（Housekeeping Proteins），如細胞骨架蛋白等。

在眾多管家蛋白中，β-Actin 與 GAPDH 是科研中使用廣泛的兩款經典內參。二者分別為細胞骨架蛋白與糖代謝關鍵酶，在絕大多數常規細胞與組織樣本中穩定表達。β-Actin、GAPDH 雖為通用內參，但并非萬能：

-β-Actin：細胞骨架蛋白，細胞骨架重構、遷移模型樣本表達易發生變化；

-GAPDH：糖代謝相關，細胞缺氧、糖代謝重塑、部分腫瘤模型中表達可能上調；

?實驗前建議根據樣本類型，合理挑選內參，必要時搭配雙內參校正，數據更可靠。